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人咽鱗癌細胞 FaDu細胞實驗操作步驟
更新時間:2024-10-05   點擊次數:196次

       在成功獲取并培養(yǎng)了人咽鱗癌細胞FaDu細胞后,接下來進入實驗操作的核心階段。首先,我們需要對細胞進行傳代處理,以確保實驗所需細胞量的充足及細胞活力的維持。具體操作如下:


1. **準備培養(yǎng)基與試劑**:確保新鮮的培養(yǎng)基(如RPMI-1640培養(yǎng)基)已預熱至37℃,并含有10%胎牛血清及必要的抗生素(如青霉素和鏈霉素),以防污染。同時,準備胰蛋白酶-EDTA溶液用于細胞消化。


2. **細胞消化**:在顯微鏡下觀察FaDu細胞生長情況,當細胞密度達到約80%-90%時,吸去舊培養(yǎng)基,用無菌PBS輕輕洗滌細胞兩次,以去除殘留的培養(yǎng)基和死細胞。隨后,加入適量預溫的胰蛋白酶-EDTA溶液,覆蓋細胞表面,放入37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中孵育約3-5分鐘,直至細胞間隙增大,形態(tài)變圓。


3. **細胞收集與重懸**:輕輕拍打培養(yǎng)皿底部,使細胞脫落,加入等體積的新鮮培養(yǎng)基終止胰酶作用,用移液槍輕輕吹打細胞懸液,確保細胞充分分散成單個。


4. **細胞計數與接種**:取少量細胞懸液進行計數,根據實驗需求調整細胞密度后,將適量的細胞懸液接種到新的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板中,輕輕搖晃使細胞均勻分布,然后放回培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。


5. **后續(xù)處理**:根據實驗目的,FaDu細胞可用于多種實驗,如藥物敏感性測試、基因編輯、信號通路研究等。在接下來的步驟中,可能需要對細胞進行轉染、加藥處理或收集細胞進行分子生物學分析。每一步操作都需嚴格遵循無菌原則,確保實驗結果的準確性和可靠性。


通過以上步驟,我們成功完成了FaDu細胞的傳代與基本處理,為后續(xù)深入研究奠定了堅實的基礎。


 

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